Methode

Der Versuch wird nach folgenden Schritten durchgeführt (Erweiterungen sind möglich):

1. Bereiten Sie Kulturröhrchen mit Medium vor entsprechend der Anzahl der zu untersuchenden Wasserproben. Für jede Probestelle sind 3x3=9 Röhrchen vorzusehen.
2. Befüllen Sie die 20ml-Reagenzgläser mit 7 ml Medium.
3. Geben Sie ein umgekehrtes Durham-Röhrchen in jedes Reagenzglas. Verschließen Sie die Röhrchen und autoklavieren Sie sie bei 121°C für 20 min.
4. Sortieren Sie immer 3 x 3 Kulturröhrchen für eine Probenahmestelle zusammen.
5. Nehmen Sie mit Hilfe steriler 1Liter-Flaschen Wasserproben im Gewässer. Führen Sie dazu ein Protokoll.
6. Schütteln Sie die Probeflaschen kurz vor der Probenverteilung.
7. Füllen Sie in die ersten drei Röhrchen 1 ml Probenwasser, in die zweiten 3 Röhrchen 100 µl Probe und in die letzten 3 Röhrchen 10 µl Probe.
8. Mischen Sie die Ansätze auf einem Vortexer.
9. Inkubieren Sie diese Ansätze bei 37°C in einem Inkubationsschrank für 18 Stunden.
10. Werten Sie die Ansätze aus (Auswertetabelle, pdf-Datei mit 572 KB):

• Trübe Ansätze zeigen "Gesamtcoliforme" an.
• Gas im Durham-Röhrchen zeigt E. coli an.
• Bei 366 nm Anregungslicht fluoreszierende Röhrchen zeigen E. coli an.
  
  
  
  
  

Erweiterungen des Versuchsansatzes:

Auswertetabelle für die Erweiterung 1 und 2

1. Koloniebildende Einheiten im Wasser
   1. Legen Sie für jede Probe eine dezimale Verdünnungsreihe bis 10-3 an.
   2. Streichen Sie aus jeder Verdünnungsstufe 100 µl Probeflüssigkeit auf DEV-Nähragarplatten aus.
   3. Bebrüten Sie diese Ansätze bei 28°C für 24 bis 48 Stunden.
   4. Zählen Sie die Kolonien aus und berechnen Sie die Koloniebildenden Einheiten (KBE) ihrer ursprünglichen Wasserprobe.
      
      
2. Chromocult für Coliforme im Wasser
   1. Streichen Sie aus der obigen Vedünnungsreihe auch 100 µl auf Chromocult-Agarplatten aus. Inkubieren Sie auch diese Agarplatten für 24-48 Stunden bei 28°C.
   2. Zählen Sie die verschiedenfarbigen Kolonien aus. Eine Auswertungshilfe finden Sie bei den Ergebnissen.
      
      
3. Readycult für Coliforme in keimarmen Gewässern
   1. Füllen Sie in ein steriles 100ml-Schottglas 100 ml Ihrer Wasserprobe ein.
   2. Geben Sie den Packungsinhalt eines Readycult-Blisters hinzu.
   3. Verschließen Sie den Kulturansatz mit einem passenden sterilen Schraubdeckel.
   4. Lösen Sie vollständig die Medienbestandteile im Probewasser.
   5. Inkubieren Sie den Ansatz bei 37°C für 18-48 Stunden.
   6. Werten Sie die Ansätze aus, in dem Sie die Trübung im Kulturgefäß und die Fluoreszenz des Mediums unter UV-Licht bei 366 nm kontrollieren.