Material

Sie benötigen:

• eine Enterobacterien-haltige Wasserprobe (Teichwasser, Stadtbrunnen, etc)
• Thermoblock oder Wasserbad bei 98°C
• Eppendorfzentrifuge und Eppendorfgefäße
• Pipetten mit passenden sterilen Pipettenspitzen
• steriles Wasser
• sterile Eppendorfreaktionsgefäße
• Eis
• 100 bp ladder (z.B. von Fermentas: SM0241 (1x0,05mg) oder SM0242 (5x 0,05mg))
• PCR-Gerät mit folgendem Temperaturprogramm:
  • 1 min bei 94°C
  • 35 Zyklen zu:
    • 60 sec bei 94°C
    • 30 sec bei 55°C
    • 2,5 min bei 72°C
    • mit einer abschließenden Komplettierung für 10 min bei 72°C.
• PuReTaq Ready-to-go PCR-beads (0,5 ml oder passend zu Ihrem PCR-Gerät; GE Health Care, Bestellnummer: 27-9558-01)
  • geben Sie jeweils 1 µl Primerlösung (jeweils 10 pmol)
  • 5 µl Template-DNA-Extrakt
  • steriles Wasser ad 25 µl in diese Gefäße
• Primer:
  int1.F: 5´-GGGTCAAGGATCTGGATTTCG-3´
  int1.R: 5´-ACATGCGTGTAAATCATCGTCG-3´
  Synthese dieser Primer z.B. durch Biomers
• Agarosegelelektrophorese: 2,5%-iges Agarosegel in TAE-Puffer, 10 V/cm
• Fotodokumentationssystem z.B. digitaler Fotoapparat mit einem GelStar Photographic Filter (Biozym, Best-Nr: 850536) und einem UV-Transilluminator.

Optional:

• NucleoSpin Extract Kit (Machery & Nagel, Best-Nr: 740609.50) zur Reinigung des PCR-Ansatzes.
• Restriktionsendonukleasen, wie z.B. PvuII und/oder BglI z.B. von Fermentas für eine RFLP (restriction fragment length polymorphism) Analyse des PCR Produktes.

Hier finden Sie eine Übersicht der zu verwendenden Rezepte.