Polymerasekettenreaktion (PCR)
Material
- chromosomale DNA aus E. coli und Bacillus subtilis (siehe das Experiment DNA-Isolierung)
- automatische 0-10 µl Pipette und 0-100 µl Pipette mit passenden sterilen Pipettenspitzen in einer Box
- Ready-to-go beads von GE Heathcare (Best-Nr: 27-9558-01), oder alternativ: der 2X PCR Mastermix von Fermentas und Taq Polymerase von Roche, oder Promega
- steriles, demineralisiertes Wasser
- Primer, z.B. von Biomers:
| Bezeichnung | Nukleotidsequenz |
| 27f | 5´-AGA GTT TGA TC(AC) TGG CTC AG-3´ |
| 1492r | 5´-GG(CT) TAC CTT GTT ACG ACT T-3´ |
- Material für die Agarosegelelektrophorese
- Längenstandard "1 kb DNA Ladder" (Fermentas)
- 6x loading dye (Auftragepuffer) von Fermentas (#R0611)
- Restriktionsendonuklease: Eco RI (Fermentas oder von Promega)
Abbildung 1: Arbeitsplatz für die Polymerase-Kettenreaktion.
Hier finden Sie eine Übersicht der zu verwendenden Rezepte.