Plasmidisolierung
Ergebnisse
Eine Agarosegelelektrophorese mit anschließender Färbung ist eine einfache Möglichkeit, ein Plasmid nachzuweisen. Das Ergebnis könnte wie in der folgenden Abbildung dargestellt aussehen.
Abbildung 1: Trennung von zwei verschiedenen Plasmiden durch Agarosegelelektrophese. Spur 1: Längenstandard, wie er links neben dem Gel in Basenpaaren (Bp) angegeben ist. Spur 2: pUC+Insert Probe aus der cracking-Präparation. Spur 3: Gleiches Plasmid wie in Spur 2, jedoch durch Plasmidisolierungskit gereinigt. Spur 4: Plasmid wie in Spur 3, jedoch mit Hind III verdaut. Spur 5: Längenstandard. Spur 6: pUC18-Plasmid aus der cracking Methode. Spur 7: pUC18, jedoch mit einem Plasmidisolierungskit gereinigt. Spur 8: pUC18 mit Hind III verdaut. Spur 9: Längenstandard entsprechend Spur 1 und 5.
Beachten Sie, dass das durch cracking und den Plasmidisolierungskit gewonnene Plasmid gleich weit laufen (Spur 6 und 7). Diese beiden Plasmidpräparationen laufen aber weiter, als das mit einer Restriktionsendonuklease linearisierte Plasmid (Spur 8). Die verschmierten Banden bei sehr großen Fragmentlängen in Spur 2 und Spur 6 sind chromosomale DNA-Fragmente. Sie treten nur bei der cracking-Methode auf, weil sie durch die Plasmidisolierungsmethode auf den Säulen abgereichert werden.