Isolierung chromosomaler DNA
Material
Sie benötigen für Bakterien (Prokaryoten):
- eine Übernachtkultur von E. coli oder Bacillus subtilis
- eine Tischzentrifuge
- automatische 1ml-Pipetten mit passenden sterilen Pipettenspitzen
- sterile 2ml-Eppendorfreaktionsgefäße
- Heizblock oder Wasserbad mit 55°C und 70°C
- den DNeasy Tissue Kit von Qiagen (69505). Mit diesem Kit können Sie bei kleinen Modifikationen DNA aus Prokaryoten, tierischem Gewebe, und Hefen isolieren.
- 96-100%-igen Ethanol
- Handbuch zum Kit (pdf-Datein, 240 K).
Für die DNA-Isolierung aus Hefen benötigen Sie zusätzlich:
- YeastBuster von Novagen
- 10 ml Sorbit-Puffer: 1 M Sorbit, 100 mM ETDA und 14 mM 2-Mercaptoethanol.
- Lyticase (Hefezellwand lysierendes Enzym)
- RNAse: Fermentas EN0531
Für die DNA-Isolierung aus tierischem Gewebe benötigen Sie zusätzlich:
Alternative Kits zur Isolierung chromosomaler DNA aus Pflanzen oder aus Phagen.
Hier finden Sie eine Übersicht der zu verwendenden Rezepte.