Enzym-Induktion
Material
Sie benötigen:
- Photometer mit den Wellenlängen 420 nm (2-Nitrophenol) und 600 nm (Wachstum, Optische Dichte)
- Lactose (z.B. Fluka 17814), Glucose (z.B. Fluka 49140), Chloramphenicol (z.B. Fluka 23276), oNPG (ortho-Nitrophenyl-beta-D-Galactopyranosid; Fluka 73660)
- E. coli DSM 613 (DSMZ oder NUGI)
- E. coli-Übernachtkultur in 5 ml LB-Medium
- 3 x 300 ml Erlenmeyerkolben mit Schikanen und Alu-Kappen, darin jeweils 33 ml steriles LB-Medium (bereiten Sie 100 ml LB-Medium vor und verteilen Sie es in gleichen Portionen auf die drei Kulturgefäße)
- BugBuster von Novagen (70584): Lagerung bei Raumtemperatur
- Stoppuhr
- 100 ml Enzympuffer (siehe unten Tabelle 2): NaH2PO4 x H2O (z.B. Fluka 71504, Mr = 138); Na2HPO4 x 2H2O (z.B. Fluka 71643, Mr = 178), MgSO4 x 7H2O (z.B. Fluka 63138, Mr = 246,5), MnSO4 x H2O (z.B. Fluka 63554, Mr = 169)
- 30 x 10 ml Reagenzgläser jeweils gefüllt mit 1 ml 1M Natrium-Carbonat, z.B. Merck 106393
- Heizblock für Eppendorfreaktionsgefäße bei 37°C
- Schüttelinkubator mit 37°C
- Eine Tabelle zur Messwerterfassung für das Wachstum und für die beta-Galaktosidase-Aktivität.
| Tabelle 1: Chemikalien für die Induktion der beta-Galaktosidase | ||
| Verbindung | Konzentration | Einwaage |
| Lactose | 100 mM | 342,3 mg/100 ml |
| Glucose x H2O | 500 mM | 1000 mg/10 ml |
| Chloramphenicol | 6,2 mM | 2 mg/ml Ethanol:Wasser (1:4, v/v) |
| Natriumcarbonat | 1000 mM | 10,6 g/100 ml |
| o-NPG | 13,3 mM | 4 g/10 ml 250 mM Na-Phosphatpuffer pH 7,0 |
| BugBuster | Gebrauchsfertige Lösung | |
| Tabelle 2: Enzympuffer | ||
| Verbindung | Konzentration im Test (mM) | Einwaage (mg/100 ml Wasser) |
| NaH2PO4 x H2O | 37 | 510 |
| Na2HPO4 x 2H2O | 63 | 1121 |
| MgSO4 x 7H2O | 1 | 24,7 |
| MnSO4 x H2O | 0,2 | 3,4 |
Hier finden Sie eine Übersicht der zu verwendenden Rezepte.