Cracking
Material
- variable Pipetten und passende sterile Pipettenspitzen
- verschiedene E. coli Klone, die nach Möglichkeit unterschiedliche Plasmide enthalten. Zum Beispiel pUC18, pHAT, pBluescript, pET, pBR322. Prinzipiell können auch andere Bakterienarten als E. coli verwendet werden.
- TE-Puffer zum Resuspendieren der Zellen
- Aufschlusspuffer ("cracking"-Puffer): lösen Sie 200 mg Saccharose in 850 µl Wasser. Geben Sie 100 µl 2 M NaOH und 50 µl 10% SDS hinzu.
- 1 ml 0,4%-ige Bromphenolblaulösung
- 10 ml 4 M KCl
- 6x loading dye solution (z.B. von Fermentas, R0611)
- DNA-Längenstandard (z.B. Gene Ruler 1kb DNA-Ladder ready-to-use von Fermentas, SM0313)
- Thermoblock für Eppendorfgefäße (oder Wasserbad) mit 70°C
- Eisbad
- Agarosegelelektrophorese
Hier finden Sie eine Übersicht der zu verwendenden Rezepte.