Methode

Das Verfahren folgt diesen Schritten:

1. Kalibrieren Sie ihre Pipetten, die Sie für dieses Experiment nutzen möchten.
2. Geben Sie jeweils in 20 x 20 ml Reagenzgläser genau 9 ml 0,9%-ige NaCl Lösung hinein. Verschließen Sie die Reagenzgläser mit Alu-Kappen.
3. Autoklavieren Sie diese Gefäße in einem Edelstahlreagenzglasständer stehend für 15 min bei 121°C.
4. Kühlen Sie die Kochsalzlösung auf Raumtemperatur ab.
5. Beschriften Sie die Gefäße der Reihe nach mit 10-1, 10-2 ... bis 10-10.
6. Messen Sie die O.D.600 Ihrer Übernachtkultur (ÜN-Kultur).
7. Geben Sie in das erste Reagenzglas (Beschriftung 10-1) genau 1 ml Ihrer ÜN-Kultur.
8. Schütteln Sie diese Mischung auf einem Vortexer für 30-60 Sekunden.
9. Entnehmen Sie steril mit einer frischen, sterilen Pipettenspitze genau 1 ml Kultursuspension.
10. Geben Sie diesen Milliliter in das zweite Reagenzglas (Beschriftung 10-2).
11. Fahren Sie fort wie in Schritt 7 bis 9 beschrieben.
12. Beschriften Sie 10 LB-Agarplatten an ihrem Bodenrand jeweils mit den Verdünnungsstufen von 10-1 bis 10-10.
13. Plattieren Sie aus jedem Reagenzglas 100 µl Bakteriensuspension auf die beschrifteten, trockenen LB-Agarplatten.
14. Verteilen Sie diese 100 µl mit dem Drigalskispatel auf der Agaroberfläche, bis Sie einen Widerstand in der Spatelbewegung bemerken. Dann ist die Flüssigkeit vollkommen in die Agarplatte aufgenommen worden.
15. Bebrüten Sie diese Agarplatten bei 37°C für 24 Stunden.
16. Zählen Sie die Kolonien auf den einzelnen Agarplatten aus.
17. Rechnen Sie alle Werte für 1 ml verdünnte Kultur hoch.
18. Kalkulieren Sie die Werte für 1 ml unverdünnte Kultur.
19. Berechnen Sie die Anzahl Zellen, die in einem Milliliter Kultur mit der O.D.600 = 1 vorkommen.