Methode

Die beta-Lactamase wird in folgenden Schritten gemessen:

1. Zentrifugieren Sie 1 ml frische E. coli Kultur (OD600nm > 1) in einem Eppendorfreaktionsgefäß ab: 5 min, 6000 Upm, Raumtemperatur
2. Überführen Sie den Überstand in ein frisches, steriles Eppendorfreaktionsgefäß.
3. Geben Sie auf den Zellniederschlag 100 µl Phenolrot-Reagenz.
4. Inkubieren Sie den Ansatz bei 37 °C (bis zu einer Stunde)
5. Beobachten Sie die Farbänderung und notieren Sie die Zeit, die Sie bis zum Erreichen des Umschlages nach gelb benötigen.
   
   
   

Variationen und Erweiterungen:

1. Zeichnen Sie mit dem Spektralphotometer das Spektrum des Phenolrotreagenzes im Bereich von 400 bis 600 nm in Abhängigkeit vom pH-Wert auf. Zeichnen Sie ebenso das Spektrum der Lösung nach Inkubation und dem Farbumschlag nach gelb auf.
2. Konzentrieren Sie den Medienüberstand aus Schritt 1 (z.B. mit Vivaspin Konzentratoren; Sartorius), um die Verteilung der beta-Lactamase-Aktivität an Zellen bzw. im Medium zu bestimmen.
3. Setzen Sie ein Kombinationspärparat wie Amoxicillin/Clavulansäure für Ihre Teste ein.
4. Verwenden Sie käufliche beta-Lactamase für ihre Testreihen.
5. Verwenden Sie Nitrocefin als beta-Lactamase-Substrat, wenn Sie eine höhere Spezifität im Testsystem wünschen.
6. Verwenden Sie beta-Lactamasetestkits zur schnellen Orientierung.