Material

Sie benötigen:

• E. coli DH5alpha
• gleicher Stamm mit Plasmid pUC18
• Material zur Züchtung dieser Bakterien in Flüssigkultur und auf Agarplatten
• Tischzentrifuge
• 1 M NaOH
• 0,5%-iges wässriges Phenolrot (Merck, 107241)
• Penicillin G, Kaliumsalz (Sigma, 13750-25g-F)
• Ampicillin, Natriumsalz, (Sigma, 10044-5g)
• sterile Eppendorfreaktionsgefäße und passenden Ständer
• Inkubationsblock mit 37 °C für diese Eppendorfreaktionsgefäße
  
  
• gebrauchsfertige Phenolrot-Reagenzienlösung: 2 ml einer 0,5 %igen Phenolrotlösung werden mit 16,6 ml Wasser verdünnt. Dann werden 20 x 1000000 units Penicillin G zugegeben. Mit 1 M NaOH wird das Reagenz auf einen violetten Farbton (pH 8,5) eingestellt. Aliquots können eine Woche bei minus 20 °C eingefroren werden.
  
  
  

eventuell zusätzlich:

• Clavulansäure (CAS 58001-44-8) oder Sulbactam; auch als Kombinationspräparat mit Amoxicillin (z.B. von ratiopharm)
• Nitrocefin (Calbiochem, 484400)
• beta-Lactamase (Sigma, 61304-25mg)
• beta-Lactamasetestkits auf Basis des Nitrocefins von BD (Best-Nr: 231749) oder von Sigma (Best-Nr: 49862-50DISCS-F)
• Inkubationsblock oder Wasserbad mit 50 bis 90 °C
• Spektralphotometer (400 - 600 nm)
• Molekülfilter Vivaspin Konzentratoren mit 30 kDa Ausschlussgrenze (Sartorius)

Hier finden Sie eine Übersicht der zu verwendenden Rezepte.