Rezepte für Enzyme
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In dieser Sammlung finden Sie:
Hemmung von Nukleasen | Hydrazin-Glycin Puffer | Lysozym/EDTA | Proteinase K | Tris-HCl Puffer
Hemmung von Nukleasen
- Restriktionsenzyme und sonstige Nukleasen sind Phosphodiesterasen.
- Solche Enzyme benötigen i.R. zweiwertige Ionen wie Mg2+ für ihre Aktivität.
- Komplexierung solcher zweiwertigen Ionen durch ETDA führt zur Inaktivierung dieser Enzyme. EDTA-Konzentration: 1-10 mM
- EDTA = Ethylenediaminetetraacetic acid, CAS 60-00-4; häufig als Di-Natriumsalz eingesetzt.
- Daher enthalten viele "Standard-Puffer" der Molekularbiologie EDTA, z.B. das "E" in TAE.
- Sicherheitsdatenblatt: ETDA
Hydrazin-Glycin-Puffer | |
pH-Wert | 9,4 |
Konzentrierung | 1-fach, gebrauchsfertig |
Volumen | 100 ml |
Zusammensetzung: | Substanz | Menge | Molarität | Molekular- | Dichte | Lieferfirma, Bestellnummer |
Glycin | 3,79 g | 75,07 g/mol | -- | Roth, 3790.1 | ||
demin.Wasser | 50 ml | -- | -- | 1,0 g/ml | ||
Hydrazinhydrat | ca. 5 ml | -- | 50,06 g/mol | 1,03 g/ml | Merck, 804608 | |
Herstellung: | Glycin in 50 ml demin. Wasser lösen, mit ca. 5 ml Hydrazinhydrat auf pH 9,4 bringen und anschließend auf 100ml mit demin. Wasser auffüllen. | |||||
Sicherheitsdatenblatt | Hydrazin, Glycin, | |||||
Lysozym/EDTA | |
pH-Wert | 8,0 |
Konzentrierung | 1-fach, gebrauchsfertig |
Volumen | 1 ml |
Zusammensetzung: | Substanz | Menge | Molarität | Molekular- | Lieferfirma, Bestellnummer |
Tris-HCl | 1,21 g/l | 10 mM | 121,21 g/mol | Fluka, 93352 | |
EDTA | 0,372 g/l | 1 mM | 372,2 g/mol | Fluka, 03680 | |
Lysozym | 50 mg/ml | Roche, 10837059001 | |||
Herstellung: | Stellen Sie einen TE-Puffer (10 mM, pH 8,0) her. Lösen Sie darin das Lysozym. | ||||
Anwendung: | Zellaufschluss von Bakterien in 10-30 min bei Raumtemperatur. Nehmen Sie Bakterien in 100 µl TE-Puffer auf. Geben Sie für Gram-negative Keime 2 µl des frisch angesetzten Lysozyms und für Gram-positive Keime 6 µl des Lysozyms hinzu. Verwenden Sie die Gebrauchslösungen möglichst frisch. Lagern Sie die Lysozym-Stammlösung ansonsten bei -20°C. | ||||
Sicherheitsdatenblatt | EDTA | ||||
Proteinase K
- Robuste, rekombinante Protease (pdf, 335 KB) aus dem Pilz Pichia pastoris zum Abbau von Proteinen
- Konzentrat: 10 mg/ml Wasser
- Aktiv im pH-Bereich 4-10, im Temperaturbereich 30-60°C, in Gegenwart von 1% SDS
- Stabil bei +4°C über 18 Monate
Tris-HCl Puffer | |
pH-Wert | variabel zwischen pH 7 und 9 |
Konzentrierung | 1-fach, gebrauchsfertig |
Volumen | 100 ml |
Zusammensetzung: | Substanz | Menge | Molarität | Molekular- | Lieferfirma, Bestellnummer |
Tris | 1,82 g | 150 mM | 121,21 g/mol | Fluka, 93352 | |
Herstellung: | Substanzen in 80 ml demin. Wasser lösen und mit 2 M HCl den gewünschten pH einstellen und auf 100ml mit demin. Wasser auffüllen. | ||||
Anwendung: | Als Puffer zur Messung vieler Enzyme geeignet. Der pKs-Wert von Tris wird mit 8.1 angegeben. Der nutzbare Pufferbereich ist also zwischen pH 7 und pH 9. | ||||
Sicherheitsdatenblatt | Tris | ||||